细胞培养污染控制策略

细胞培养是一项复杂且细致的实验工作，它在生物医学研究中占据着重要位置。细胞污染是细胞培养中最常见、最棘手的问题，在发现细胞形态异常时，一定要及时排查污染并进行处理，否则会给我们的实验造成极大的影响。细胞污染不仅会影响实验结果的准确性，还可能导致实验的彻底失败。

处理方法：在培养基中加入抗生素处理，可以用四环素，庆大霉素，或者链霉素，前两者的工作浓度是50 μg/mL；链霉素的工作浓度是100 μg/mL。但是，细胞本身也有影响，状态大不如从前，所以，防范于未然，正确操作、严格执行无菌操作规范，定期清理消毒。

真菌污染

真菌和酵母是细胞培养中另一类常见的污染源。它们会在培养皿或培养瓶中形成棉状块或丝状物，严重影响细胞生长。预防真菌/酵母污染的方法包括严格控制培养室湿度、定期清洁消毒培养器具、避免长时间暴露培养物于空气中等。

处理方法：一旦发现真菌污染，建议立即舍弃受污染的细胞，并对整个培养环境进行彻底的消毒灭菌处理。包括CO2培养箱、器皿和培养液等所有可能被污染的对象。

支原体污染

支原体非常微小，常规光学显微镜难以看清它的形态结构，除菌过滤无法去除。它们附着在细胞表面，导致细胞状态变差、生长缓慢。支原体感染不易发觉，但会严重影响细胞实验的结果。

处理方法：采用PCR、ELISA等方法定期检测支原体污染，确保细胞培养环境的纯净，对于珍贵的细胞，可以考虑使用支原体清除培养基进行处理。这种特殊成分的培养基可以有效清除支原体，减少因污染带来的损失。

霉菌污染

正常情况下，培养基在 37℃ 培养箱中培养两三天，在倒置显微镜下仍保持透明，无杂质。一旦出现絮状杂质，显微镜下可见丝状和团块状漂浮物，菌丝明显。此时，虽然细胞仍在生长，但它们的生命状态会在长时间后逐渐恶化。

处理方法：用硫酸铜溶液擦拭 CO₂ 培养箱，向托盘中加入饱和硫酸铜或消毒后加入饱和磷酸氢二钠高盐溶液，避免霉菌污染。

交叉污染

交叉污染是指从一个培养物传播到另一个培养物的现象，常见于细胞培养物品、器具或操作过程中。为避免交叉污染，可以定期清洁和消毒工作台、培养箱等设备，避免混合使用实验器具。总的来说，细胞培养中的常见污染种类繁多，控制污染源、加强无菌操作、定期消毒和检测培养物的纯度等措施是预防污染的关键。及时发现并处理污染现象，对于确保细胞培养实验的准确性和可靠性至关重要。

处理方法：通过STR（短串联重复序列）分析等分子生物学技术，定期验证细胞株的纯度，防止交叉污染。

化学污染

化学污染主要指培养基、试剂中含有的毒性化学物质，这些物质可能来源于不纯的试剂、实验设备的残留物等。这些化学物质会影响细胞的正常生长，甚至导致细胞死亡。

处理方法：立即丢弃污染后的培养基并更换新鲜培养基避免扩大污染，清洗细胞容器，养成良好的无菌操作习惯，避免污染发生。

防止细胞污染的措施

1. 严格的无菌操作

无菌操作是防止微生物污染的关键。实验人员在进行细胞培养操作时，应严格遵守无菌操作规范：

• 手部消毒：操作前、操作过程中应频繁使用消毒液消毒双手。

• 使用无菌耗材：培养皿、移液器吸头、试管等耗材应保证无菌。

• 定期清洁工作台：使用75%乙醇或其他适宜的消毒液擦拭工作台面，保持工作环境的清洁。

• 无菌工作台：在无菌工作台（如生物安全柜）中进行所有细胞操作，定期对工作台进行清洁和消毒。按照说明书或操作SOP要求正确使用无菌工作台。

2. 培养基和试剂的质量控制

• 使用高质量的培养基和试剂：选购经过严格质量控制的培养基和试剂，避免使用来源不明或储存时间过长的试剂。并且需要对血清进行常规污染检测，以及良好的分装习惯和体系。

• 培养基的无菌过滤和存储：制备培养基时应进行无菌过滤，去除可能存在的微生物，无菌过滤后可使用百林科BioHub® 的一次性储液瓶进行储液。

百林科BioHub^® 一次性储液瓶

• 分装管理：培养基和试剂应尽量小批量分装，避免重复开封导致的污染。所有分装使用或备用的试剂（如血清、胰酶）都应记录批次号。

3. 细胞处理

• 细胞分离：不同细胞株应在不同的培养皿或培养瓶中培养，避免交叉污染。

• 冷冻和复苏：细胞冷冻和复苏过程中要严格遵守操作规程，确保细胞存储和处理过程中的无菌性。

4. 良好的实验室管理

• 定期监测实验室环境：通过定期的环境监测，及时发现并处理潜在的污染源。

• 独立的实验区：将细胞培养区与其他实验区分开，避免交叉污染。

• 分开存放细胞株：不同细胞株应尽量分开培养和储存，避免交叉污染。

5. 设备的定期维护

• 培养箱的定期清洁和消毒：定期对培养箱进行清洁和消毒，防止微生物滋生。

• 显微镜和移液器的清洁：实验结束后，应及时清洁和消毒显微镜、移液器等设备，避免残留物积累。

6. 培训和规范操作

• 操作人员培训：定期对实验人员进行无菌操作培训，确保其掌握正确的操作技巧和无菌观念。

• 操作规程：建立并严格执行实验室操作规程，确保每个环节都符合无菌操作标准。

• 实验记录：详细记录每次操作的步骤和结果，及时发现和纠正操作中的问题。

总的来说，面对细胞培养中的污染问题，虽然有一系列处理方法可以尝试挽救受污染的细胞，但最重要的还是采取有效的预防措施，避免污染的发生。通过加强实验室管理、提升操作技能、使用优质试剂材料和耗材（无菌一次性耗材）以及建立严格的质控体系，可以大大降低细胞污染的风险，保障实验的顺利进行。

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