作为一种非细胞型生物,病毒通常寄生于活细胞内,利用宿主的代谢系统以复制的方式进行增殖。
病毒(Biological virus)是一种非细胞的生命形态,个体小、结构简单,通常只含有一种核酸,即 DNA 或 RNA。 虽然大家谈“病毒”色变,但随着科学研究的发展,运用科学的手段,引入部分或全部的病毒成分,或者使用经过处理的病毒,可以激发人体免疫系统产生特定的抗体和免疫细胞,病毒疫苗的概念由此诞生。 病毒疫苗的开发历经了严格的科学探究和临床试验,以确保其具有安全性和有效性。常见的病毒疫苗有流感疫苗、狂犬疫苗、水痘疫苗、肝炎疫苗、肺炎疫苗等。 病毒疫苗的纯化过程 在病毒的研究中,提纯是其必不可少的重要一环,高纯度的病毒样品使对病毒的研究更详尽;同理,先进的分离纯化技术会对病毒疫苗的制备起到关键性作用。 提到疫苗的纯化方法,首先映入脑海的可能是亲和层析、离子交换层析、疏水层析,其中,最容易被人忽视的,可能就是凝胶过滤层析。本期,我们主要对病毒疫苗纯化过程中的凝胶过滤层析介质进行介绍。 凝胶过滤层析(Gel Filtration Chromatography,GFC),又被称为尺寸排阻层析(Size Exclusion Chromatography,SEC),其分离原理主要是利用球状凝胶内的筛孔的大小,分离不同分子量大小样品的一种方法。
凝胶过滤层析示意图
Chromstar® 4FF 作为凝胶过滤层析介质的典型代表,通常应用在重组蛋白、抗体、核酸、病毒及类病毒颗粒、多糖等领域,尤其是在流感疫苗中有着突出的表现:一方面可以去除鸡胚流感疫苗中的卵清蛋白;另一方面在细胞流感疫苗中,在 HA 的产率和蛋白的去除率上都有很好的效果。 技术参数
* 当柱床高度≥ 60 cm 时,推荐将流速降至 45~60 cm/h。
** 层析介质在 40 ℃,pH 2-14 环境下放置7天后,其理化性质和功能没有明显变化。
应用案例
Chromstar® 4FF纯化流感病毒疫苗 填料:Chromstar® 4FF 层析柱:Chrom-LinX® 16/700 (H=60 cm) 样品:流感病毒 样品体积:10 mL 流速:6 mL/min 缓冲液:10 mM PBS
小结:Chromstar® 4FF 三次纯化该流感疫苗,HA 回收率均能达90%以上,蛋白去除率可达47%。
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