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纯化小技巧 | 带状疱疹疫苗常用填料分享


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带状疱疹是由水痘——带状疱疹病毒(varicella-zoster virus,VZV),引起的一种感染性疾病。

对于该感染性疾病,医学上尚无特效药,对其进行预防接种疫苗则成为目前最有效、最经济的手段。当今带状疱疹疫苗的研发工艺路径主要分为三种类型:减毒活疫苗、基因工程重组疫苗及mRNA疫苗。目前,全球销售规模最大的疫苗则主要以重组带状疱疹疫苗为主。


重组带状疱疹疫苗层析纯化工艺路线

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阴离子捕获——MaXtar® Q

在捕获阶段选择阴离子交换层析介质,可以去除一大部分HCP和杂质蛋白,最大程度获取目的物。百林科MaXtar® Q强阴离子交换层析介质,其基架具有更强刚性,在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率;配基偶联方式的升级,可以有效提高层析介质的动态结合载量。


MaXtar® Q能有效捕获目的蛋白

MaXtar® Q纯化重组带状疱疹疫苗发酵液上清,能有效捕获高纯度目的蛋白。

层析柱:Chrom-LinX® 26/400,柱高20 cm

样品:重组带状疱疹疫苗发酵液上清

Buffer A:20mM PB,pH6.8

Buffer B:20mM PB,1M NaCl,pH6.8

流速:120 cm/h

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图1 MaXtar® Q纯化带状疱疹疫苗层析图谱

针对MaXtar® Q纯化层析介质,百林科也对其在耐酸碱盐条件下的使用寿命做了一定研究。通过模拟CIP条件(1M HAc+1M NaCl,1M NaOH),进行150个循环后,我们发现,MaXtar® Q的动态结合载量没有明显差异。

图片3.png

图2 不同循环测试MaXtar® Q的动态结合载量表现

疏水中度纯化——Phenyl Chromstar® HP

中度纯化阶段选择疏水相互作用层析介质,去除样品中的主要杂质,并进一步去除HCP。百林科的Phenyl Chromstar® HP采用细粒径设计,分辨率提高。


Phenyl Chromstar® HP分辨率高

带状疱疹疫苗经Phenyl Chromstar® HP疏水层析介质纯化后纯度可达98%。

层析柱:Chrom-LinX® 26/200,柱高15 cm

样品:Maxtar® Q洗脱收集液(加入硫酸铵至电导为98-105 mS/cm)

Buffer A:0.6M (NH4)2SO4·PBS

Buffer B:纯化水

流速:120 cm/h

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图3 Phenyl Chromstar® HP纯化带状疱疹疫苗层析图谱

图片6.png

图4 Phenyl Chromstar® HP纯化后

带状疱疹疫苗HPLC-SEC图


阳离子精纯——MaXtar® SP HR

精纯阶段选择阳离子交换层析介质,经合适的纯化条件,采用流穿模式,使内毒素、HCD、HCP等痕量杂质结合,目的蛋白流穿。百林科的MaXtar® SP HR在有效去除HCP和HCD杂质的情况下,具有优异的放大生产性能,其基架具有更强刚性,因此在较低的反压下能够实现更高工艺流速,提高工艺效率;配基偶联方式的升级,可以有效提高层析介质的动态结合载量;具有更细的颗粒粒径,有效提高层析介质的分辨率。


MaXtar® SP HR能有效去除HCP和HCD杂质


经MaXtar® SP HR纯化后,HCP和HCD均符合质量要求。

层析柱:Chrom-LinX® 26/200,柱高10 cm

样品:超滤后收集液

Buffer A:20mM PB,pH5.8

Buffer B:20mM PB,1M NaCl,pH5.8

流速:60 cm/h

改改图33.png图3 MaXtar® SP HR纯化带状疱疹疫苗层析图谱

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表1 MaXtar® SP HR纯化前后HCP和HCD结果对比


相关产品信息

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