纯化小技巧| Puredex® 系列在诊断中的应用

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Puredex^® G系列填料，想必大家都不陌生，作为交联葡聚糖基架的凝胶过滤层析介质，通常用于多种生物分子的脱盐、缓冲液置换，以及小分子物质的分离纯化，比如：多肽等。

Puredex^® G系列填料根据分离范围的不同，通常分为Puredex^® G-10，Puredex^® G-25，Puredex® G-50系列；按照颗粒粒径从大到小排列，分别冠以C（Coarse，粗粒径）、M（Medium，中等粒径）、F（Fine，细粒径）、SF（Superfine，超细粒径）的后缀。

随着检验技术的发展，选择合适粒径的Puredex^® G-25或Puredex^® G-50系列，利用其分子筛原理，通过添加可以与红细胞抗原结合的抗体，即增加亲和原理的方式，制作成凝胶微柱管，经过低速离心后，凝集后的红细胞会悬浮在填料的上层，而未能与抗体结合红细胞就会通过填料到达管底，利用此原理可以实现血型的鉴定。

通常情况下，根据不同的血型鉴定需要，会制备成中性凝胶柱、特异性凝胶柱等。其中，在中性凝胶检测中，填料不含抗体，常用于检测IgM抗体及红细胞抗原的反应，通常进行ABO血型正、反定型等；而在特异性凝胶中，会填料含有特异性血型的抗体，常用于检测血型抗原。

百林科Puredex^® G-25系列由四款不同粒径的层析介质组成，按照颗粒粒径从大到小排列，分别是Puredex^® G-25C、Puredex^® G-25M、Puredex^® G-25F、Puredex^® G-25SF。Puredex^® G-50系列则由三款不同粒径的层析介质组成，按照颗粒粒径从大到小排列，分别是Puredex® G-50M、Puredex^® G-50F、Puredex^® G-50SF。

其中，粒径大小在F（细粒径）及更大粒径的Puredex^® G-25和Puredex^® G-50，常作为缓冲液及小分子物质的分离；粒径最小的Puredex^® G-25SF和Puredex^® G-50SF，常作为微柱凝胶血型卡的材料，用于血型鉴别。

技术参数

* 干粉状态下测量，分布在范围内的百分比≥ 80%。

** 层析介质在40℃，pH2-13 环境下放置7 天后，其理化性质和功能没有明显变化。

使用小技巧

Puredex^® G系列填料通常以干粉的方式供货，因此使用前需要对其进行溶胀，然后再装填到层析柱内使用。
根据预计装填层析柱的柱体积计算所需要的Puredex^® G干粉的量（Puredex^® G-25溶胀约4-6 ml/g，Puredex^® G-50溶胀约9-10 ml/g）。
将Puredex^® G-25干粉填料按照4-6 ml纯化水/g的比例加入纯化水（或其他缓冲液），室温下溶胀1-3个小时，或≥90℃的纯化水1个小时。
将Puredex^® G-50干粉填料按照6-8 ml纯化水/g的比例加入纯化水（或其他缓冲液），室温下溶胀3-8个小时，或≥90℃的纯化水3个小时。
溶胀过程中可以适当搅拌以加快填料与缓冲液的接触面积，但注意不要使用磁力搅拌子搅拌，磁力搅拌子会导致填料颗粒破裂。
填料溶胀后建议在负压下脱气，以减少装填过程中气泡的产生。
填料溶胀完成后，去掉部分上层清液及可能的悬浮填料，制备装柱胶悬液比例为50%-60%，搅匀备用。