MaXtar® SP HR 广泛应用于抗体(包括单抗、双抗)及重组蛋白的纯化工艺中。
随着行业不断发展,复合模式填料的种类日益丰富,为许多项目提供了更多选择。但高分辨率阳离子填料凭借分辨率高、易于工业放大、成本相对较低等优势,在大分子生物制药领域仍维持较高的市场需求。基于此,本文将全面介绍百林科的高分辨率阳离子产品——MaXtar® SP HR。
优异的分离能力 MaXtar® SP HR 优异的分离性能主要源于其粒径分布。该产品平均粒径为 40 μm,整体粒径较小,导致理论塔板数(N)较高,因此具有较高的分离度。而MaXtar® SP HR的离子交换作用模式则源于其配基(磺丙基)的性质,从而根据电荷差异分离杂质与目的蛋白,以及电荷异构体。 应用案例一 样品信息:双特异性抗体(pI 8.6) 柱体积:4.7 mL(H=10 cm) 平衡缓冲液:10 mM HAc, 10 mM PB, 10 mM柠檬酸,pH5.0 洗脱缓冲液:10 mM HAc, 10 mM PB, 10 mM柠檬酸,1M NaCl, pH7.5 (0-100%B,10CV) 载量:20 mg/mL
图1:双抗纯化层析图谱
表1:双抗纯化前后SEC纯度表现
小结: MaXtar® SP HR在此双抗的纯化中具有优异的分离效果,其中低分子杂质去除能力尤为显著,低分子杂质由7.14%下降至0.27%,最终SEC纯度达到99.7%。 应用案例二 样品信息:带状疱疹疫苗(VZV) 柱体积:53 mL(D=26 mm, H=10 cm) 平衡缓冲液:20 mM PB,pH5.8 洗脱缓冲液:20 mM PB,1 M NaCl,pH5.8 (50%B,5CV) 保留时间:10 min
图2:带状疱疹纯化层析图谱
表2:MaXtar® SP HR纯化前后残留含量
小结:MaXtar® SP HR在疫苗项目中以流穿模式进行纯化,可有效降低HCP与HCD的残留。
优异的性能表现 1、优异的批间表现
图3:MaXtar® SP HR 2批次结合力表现
小结: 使用溶菌酶标准蛋白对MaXtar® SP HR结合力进行表征,不同批次结合能力无明显差异。 2、工业化放大表现 (1)压力流速曲线
图4:MaXtar® SP HR压力流速曲线
(2)生产装柱
表3 & 图5:MaXtar® SP HR填料
工业放大应用案例
小结: MaXtar® SP HR基于MaXtar® 高流速改良琼脂糖基架,压力达到3 bar时,线性流速≥270 cm/h,已成功应用于工业化生产。 3、寿命验证表现 实验信息: 柱体积:5.3 mL(D=6.6mm H=15.5 cm) 载量:53 mg/mL填料 循环次数:160 消毒方式:1 M NaOH
图6:MaXtar® SP HR寿命验证层析图谱叠图
图7:(a)寿命实验过程中的SEC纯度表现;
(b)寿命实验过程中酸碱峰变化表现。
小结:
MaXtar® SP HR 寿命验证160次循环后层析图谱无明显差异,SEC纯度与酸碱峰分布基本保持不变。
纯化策略总结 当MaXtar® SP HR 主要应用于重组蛋白与抗体纯化时,其作用模式为离子交换,分离机制基于目的蛋白与杂质之间的电荷差异。因此,通常通过调节盐浓度(如NaCl)或pH值来实现电荷性质不同的组分之间的分离。 工艺开发初期,建议优先采用NaCl线性洗脱,初步掌握杂质与目的蛋白的洗脱电导范围,后续可进一步优化为歩级洗脱。 若仅通过盐梯度无法实现有效分离,可进一步尝试pH线性优化,或采用pH与NaCl相结合的双梯度优化策略。 需注意载量对分辨率的影响:载量越高,分辨率越低;而载量过低则会影响目的蛋白的回收率以及工业放大后的经济效益。因此,在保证分辨率的同时,也需确定合适的载量范围。
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