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纯化小技巧 | MaXtar® Phenyl HR 高分辨填料疏水纯化实操


疏水层析作为生物制药下游纯化核心工艺之一,凭借独特的分离选择性,能够高效去除聚体、降解片段、HCP 等关键杂质。MaXtar® Phenyl HR 作为百林科核心疏水层析介质之一,适配多种工艺模式,广泛应用于抗体、重组蛋白与 酶等项目的精纯工序。产品具有高分辨率、优异的批间稳定性与良好的成本优势,作为百林科国产化替代填料,可助力药企推进下游国产化替代落地与筑牢供应链自主可控的能力,下文将对其各项核心优势展开详解。






优异的聚集体分离能力

MaXtar® Phenyl HR 具有高分辨率(D50=40μm)改良琼脂糖基架,与疏水性能进行分离的层析原理,使其具有优异的杂质去除能力尤其针对聚集体的去除。


应用案例一

  • 样品信息:双特异性抗体(pI 8-9)

  • 柱体积:4.7mL(H=10cm)

  • 平衡缓冲液:20mM Tris-HCl,1M (NH4)2SO4 ,pH 7.4

  • 洗脱缓冲液:20mM Tris-HCl,pH 7.4

  • 载量:30mg/mL



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图1:双抗纯化层析图谱


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表1. 双抗纯化前后SEC纯度表现



小结:MaXtar® Phenyl HR在此双抗的纯化中具有优异的分离效果,高分子杂质由初始的4.59%降低至0.6%,洗脱蛋白纯度达到99.40%



应用案例二

  • 样品信息:双抗 (FT模式)

  • 柱体积:4.7mL(H=10 cm)

  • 平衡缓冲液:20mM NaAc-HAC,pH6.0

  • 流穿载量:150mg/mL

  • 收集方式:100mAU-MaX-200mAu



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图2:双抗纯化层析图谱(FT模式)


表2.jpg

表2:双抗纯化后纯度与收率表现


小结:MaXtar® Phenyl HR作为疏水性较强的疏水填料,除了结合洗脱方式去除聚集体,还可在低盐条件下运用流穿模式实现少量聚集体的剔除。相较于阴离子交换流穿工艺,该策略在聚集体清除方面具备独特优势,为工艺开发提供更多的纯化选择。



优异的生产控制与批间稳定性


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图3:MaXtar® Phenyl HR三批填料疏水性表征


使用单抗对MaXtar® Phenyl HR 三批填料进行疏水性表征,不同批次峰型与出峰位置基本一致,疏水性无明显差异。


优异的工业性能—兼具流速与耐压


压力流速曲线

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图4:MaXtar® Phenyl HR压力流速曲线



生产装柱

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表3 & 图5:工业级层析柱装柱


MaXtar® Pheny HR基于Maxtar高流速改良琼脂糖基架,在D=300cm,H=15cm条件下,压力达到3bar时,最大流速为270cm/h; 在实际生产中,MaXtar® Phenyl HR已成功应用于D=600mm的柱子,具有稳定的放大性能。


应用注意事项


添加剂使用策略

MaXtar® Phenyl HR作为疏水性较强的疏水填料,在纯化过程中可能存在目的蛋白部分洗脱与洗脱不下来的问题,除了降低平衡液盐浓度,还可以使用添加剂降低疏水相互作用,常见添加剂与作用原理如下:


表3.jpg

表4:常见添加剂与作用原理


但在实际生产中,添加剂的的选择也要考虑后续能否去除,基于法规与药品安全性考虑,非极性物质一般不建议添加。



影响因素控制

疏水层析受多重条件影响,温度、上样载量、上样缓冲液 pH 与盐浓度等,都会显著影响介质的疏水分离效果。工艺开发与规模化生产阶段应尽量保持层析运行温度一致,降低批次分离结果差异;也可采用线性梯度洗脱策略,缓解温度波动对洗脱行为带来的干扰。


表4.jpg

表5:产品货号及规格


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