纯化小技巧 | 我有我的Tag—亲和层析标签选择，谁是你的最佳搭档？

亲和层析标签技术是蛋白研究的基石，通过给目标蛋白“打上标签”，使其可被识别和捕获，进一步与亲和层析技术结合起来，把原本“不可见”的蛋白变化转化为可识别、可捕获、可看见的信号，让复杂体系比如通路研究、药物研究中的有关蛋白能被看见、定量和比较。

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图1：百林科全系列标签亲和纯化产品，覆盖多种标签，适配原核、真核不同表达系统

常用蛋白标签的功能分类

图2：蛋白标签种类

常用蛋白标签及特点

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表1-3：常用蛋白标签及特点

蛋白标签选择方法

蛋白标签的选择需要围绕核心需求进行取舍：

优先明确实验目的：如果需要大规模蛋白纯化，首选His-tag,因其标签小，成本低，通用。如果需要高纯度蛋白制备，可以选Strep-tag II/Twin-Strep、Flag-tag，或串联标签（如His-Flag、His-Strep），兼顾纯化效率与特异性。如果需要进行蛋白互作研究，如WB等，可优选表位标签。如果需要保留蛋白活性，优先选择温和条件洗脱的标签，如Strep-tag II/Twin-Strep、Flag-tag等。
考虑目标蛋白特点：蛋白分子量小，优先选择小分子量标签，避免大标签掩盖蛋白功能。如果蛋白溶解性较低，可优选MBP等促溶标签，或His-SUMO双标签。
匹配蛋白表达系统：除His标签可适配不同表达系统外，原核表达容易产生包涵体蛋白，可选择GST、MBP、SUMO等促溶标签，帮助蛋白正确折叠。真核细胞因本身就拥有完善的蛋白加工和折叠系统，选择标签时更倾向于不影响蛋白本身结构核功能，所以更倾向于Flag、HA等小标签。
兼顾整体成本与后续操作：大规模实验优先选His-tag,因其填料价格较低，纯化用试剂成本低，小规模蛋白实验可选用Strep/Flag-tag，因其特异性更高，可减少后续纯化操作和成本。另外需考虑是否需要酶切，大标签通常需要在构建载体时增加酶切位点进行酶切操作，小标签常无需酶切，可直接用于后续实验。